elisa检测方法

elisa是什么检测方法 ELISA检测方法的介绍

1、ELISA是酶联免疫吸附测定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA) 的简称。它是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。

2、原理如下：

（1）使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。

（2）使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅来进行定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。

elisa是什么检测方法

　　1、ELISA是酶联免疫吸附测定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA) 的简称。它是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。

　　2、原理如下：

　　（1）使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。

　　（2）使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅来进行定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。

ELISA试剂盒怎么识别真伪？

　　在国内生物研究蓬勃发展的现在，假冒无视科学研究的严谨性和严肃性，让广大的科研工作者被动造假，严重破坏了科研氛围，扰乱了市场秩序，联科生物整理了一些鉴别这些假冒伪劣ELISA试剂盒的方法，供广大的科研工作者和用户参考，让希望对广大科研工作者有所帮助。
　　购买前
　　【方法一】向厂家索要或从其网站下载说明书，查找ELISA的性能指标：准确度(加标回收率、稀释线性)、精密度(板内差、板间差)、灵敏度、样本值、特异性、校准。一般来说，除了校准不一定每份说明书都有外，其余的指标一般都需要罗列(部分样本需要高倍稀释的，可能没有准确度这个指标)。如果无法提供这些性能指标，则说明该试剂盒可能是假货，或者试剂盒开发过程不够科学严谨，有可能无法检测出真实的样本值。
　　【方法二】对于夸大ELISA涵盖的指标的范围，尤其是不常见的种属，可先去国际知名ELISA试剂盒供应商(如eBioscience、R&D)网站上搜索，如果搜索不到该种属的ELISA试剂盒，则有可能是假货，需要小心谨慎。
　　【方法三】将“厂家名”、“ELISA”和“假货”等关键词在网上搜索，有的网站或论坛如丁香园等会有打假曝光台。
　　购买后
　　【方法一】检查说明书、包装盒的质量，通常假冒伪劣产品为了降低成本，印刷的质量会比较差。其次仔细阅读说明书，如上所示查找ELISA的性能指标。
　　【方法二】
　　Ⅰ.
利用干扰实验即可鉴别ELISA试剂盒是否检测目的抗原，方法如下：
　　(1)
将针对试剂盒特异性的重组蛋白抗原和试剂盒中的检测抗体配置成antibody:
antigen=
1:2的混合孵育液
　　(2)
37℃孵育15分钟后，代替原试剂盒中的检测抗体
　　(3)
后续操作按照试剂盒说明书进行，加检测抗体、酶复合物和底物
　　(4)
实验完毕后，检测其标准曲线，如果标准曲线良好则说明加入的目的抗原和试剂盒抗体不匹配，试剂盒检测抗体针对的是非目的抗原，该试剂盒为伪劣假造ELISA试剂盒。
　　(5)
如果标准曲线无线性，则说明试剂盒检测抗体已被目的抗原中和或干扰，影响了其实际试剂盒抗体的检测作用，则该试剂盒检测抗体针对的是目的抗原。
　　Ⅱ.如果购买了两盒同一公司的ELISA试剂盒A和B，利用交叉实验即可鉴别ELISA试剂盒是否造假，方法如下：
　　(1)
取出购买的试剂盒A的包被板两条。
　　(2)
一条包被板加试剂盒A的标准品做标准曲线。
　　(3)
另一条包被板加试剂盒B的标准品做标准曲线。
　　(4)
后续操作按照试剂盒说明书进行，加检测抗体、酶复合物和底物。
　　(5)
实验完毕后，检测两条标准曲线，如果两条标准曲线一致则说明两个ELISA试剂盒检测的同一个指标而非A和B，即该试剂盒为伪劣假造ELISA试剂盒。
　　(6)
如果两条标准曲线不一致则说明两个ELISA试剂盒检测的不同指标，试剂盒A只能检测A，不能检测B，即该试剂盒为正常的ELISA试剂盒。

elisa 是什么检测方法

ELISA是酶联免疫吸附测定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA) 的简称。它是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术 。
原理如下：
①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。
②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅来进行定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。

elisa的原理和实验步骤

ELISA的原理ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。操作步骤:1．从已平衡至室温的密封袋中取出试验所需板条，未用的板条和干燥剂请放回铝箔袋内压 实自封条，密封口袋，放回4℃。2．空白孔加标准品和标本稀释液，其余相应孔中加标本或不同浓度标准品(100ul/孔)，用封板胶纸封住反应孔，36℃孵箱孵育90分钟。3．提前20分钟准备生物素化抗体工作液。4．洗板5次。5．空白孔加生物素化抗体稀释液，其余孔加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)。用新封板胶纸封住反应孔，36℃孵箱孵育60分钟。6．提前20分钟准备酶结合物工作液。避光室温(22-25 ) ℃ 放置。7．洗板5次。8．空白孔加酶结合物稀释液，其余孔加入酶结合物工作液(100ul/孔)。用新封板胶纸封住反应孔，36℃孵箱，避光孵育30分钟。9．打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。10．洗板5次。11．加入显色底物(TMB)100ul/孔，避光36℃孵箱，避光孵育15分钟。12．加入终止液100ul/孔, 混匀后即刻测量OD450值(3分钟内)。在仪器保存读数结果并打印一份纸质结果。13．实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回电冰箱保存至有效期结束。建议保存酶标板框，以备下次或者今后试验使用。【摘要】elisa的原理和实验步骤【提问】ELISA的原理ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。操作步骤:1．从已平衡至室温的密封袋中取出试验所需板条，未用的板条和干燥剂请放回铝箔袋内压 实自封条，密封口袋，放回4℃。2．空白孔加标准品和标本稀释液，其余相应孔中加标本或不同浓度标准品(100ul/孔)，用封板胶纸封住反应孔，36℃孵箱孵育90分钟。3．提前20分钟准备生物素化抗体工作液。4．洗板5次。5．空白孔加生物素化抗体稀释液，其余孔加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)。用新封板胶纸封住反应孔，36℃孵箱孵育60分钟。6．提前20分钟准备酶结合物工作液。避光室温(22-25 ) ℃ 放置。7．洗板5次。8．空白孔加酶结合物稀释液，其余孔加入酶结合物工作液(100ul/孔)。用新封板胶纸封住反应孔，36℃孵箱，避光孵育30分钟。9．打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。10．洗板5次。11．加入显色底物(TMB)100ul/孔，避光36℃孵箱，避光孵育15分钟。12．加入终止液100ul/孔, 混匀后即刻测量OD450值(3分钟内)。在仪器保存读数结果并打印一份纸质结果。13．实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回电冰箱保存至有效期结束。建议保存酶标板框，以备下次或者今后试验使用。【回答】【提问】二个月后这个报告安全了吗【提问】亲，这个的话您要去问专业人士哦【回答】

ELISA实验步骤有哪些？

ELISA实验原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，此种结合不会改变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色氧化型，出现颜色反应。因此，可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。此种显色反应可通过ELISA检测仪进行定量测定，这样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来，使ELISA方法成为一种既特异又敏感的检测方法。ELISA实验步骤及注意事项:1、固相载体选择聚苯乙烯：具有较强的吸附蛋白质的性能，抗体或抗原吸附其上后仍保留原来的免疫学活性。聚氯乙烯：聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高。良好的ELISA板应该是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之间、同一板各孔之间性能相近。2、包被①板孔的选择：ELISA级别的微孔板。②抗体选择：选择支持ELISA实验的抗体，根据推荐浓度稀释或摸索最适浓度。③包被缓冲液：pH9.6碳酸盐缓冲液或pH7.2磷酸盐缓冲液。④包被温度：2-8 ℃过夜包被或室温（37℃）包被2h。⑤包被浓度：包被浓度随载体和包被物的性质可有很大的变化。一般包被浓度为10ug/ml-20ug/ml。3、封闭①包被之后一定要立即封闭（封闭非特异性抗体）。②选择效果较好的封闭剂（细胞培养级BSA、Tween等）。4、加样及孵育①加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。②孵育的时间及温度参考试剂盒说明书。如有条件，建议加样孵育时使用shaker震荡仪，推荐轨道直径3mm，转速在500±50rpm。③检测抗体、酶标物的稀释比例、孵育温度、孵育时间严格根据说明书提示。④洗板对于ELISA来说，是极其关键的一步，保证ELISA的特异性。⑤封板膜一定要一次一换，切勿二次甚至多次使用，以防交叉污染。5、显色和终止①使用前需检查，底物在加入96孔板之前应为无色透明。②显色底物需现配现用，避免污染。③孵育时间，说明书上为参考范围，具体需要根据实验条件自行摸索。可参考标曲浓度最大孔的颜色，变为蓝色较明显时即可。

elisa实验原理是什么？

ELISA实验原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，此种结合不会改变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色氧化型，出现颜色反应。因此，可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。此种显色反应可通过ELISA检测仪进行定量测定，这样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来，使ELISA方法成为一种既特异又敏感的检测方法。ELISA实验步骤及注意事项:1、固相载体选择聚苯乙烯：具有较强的吸附蛋白质的性能，抗体或抗原吸附其上后仍保留原来的免疫学活性。聚氯乙烯：聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高。良好的ELISA板应该是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之间、同一板各孔之间性能相近。2、包被①板孔的选择：ELISA级别的微孔板。②抗体选择：选择支持ELISA实验的抗体，根据推荐浓度稀释或摸索最适浓度。③包被缓冲液：pH9.6碳酸盐缓冲液或pH7.2磷酸盐缓冲液。④包被温度：2-8 ℃过夜包被或室温（37℃）包被2h。⑤包被浓度：包被浓度随载体和包被物的性质可有很大的变化。一般包被浓度为10ug/ml-20ug/ml。3、封闭①包被之后一定要立即封闭（封闭非特异性抗体）。②选择效果较好的封闭剂（细胞培养级BSA、Tween等）。4、加样及孵育①加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。②孵育的时间及温度参考试剂盒说明书。如有条件，建议加样孵育时使用shaker震荡仪，推荐轨道直径3mm，转速在500±50rpm。③检测抗体、酶标物的稀释比例、孵育温度、孵育时间严格根据说明书提示。④洗板对于ELISA来说，是极其关键的一步，保证ELISA的特异性。⑤封板膜一定要一次一换，切勿二次甚至多次使用，以防交叉污染。5、显色和终止①使用前需检查，底物在加入96孔板之前应为无色透明。②显色底物需现配现用，避免污染。③孵育时间，说明书上为参考范围，具体需要根据实验条件自行摸索。可参考标曲浓度最大孔的颜色，变为蓝色较明显时即可。

elisa实验原理是什么？

elisa实验原理是在于抗原抗体之间的特异结合反应，所以任何优质的诊断试剂离不开优质的原料，如抗原抗体，酶等。抗原和抗体跟酶交连以后仍然能够保持活性和酶的催化性。交连后的酶根底物可以进行反应，催化分解，使其产生有色物质。根据有色物质的多少和颜色深浅通过酶测曲线得出结论。elisa是用血清来检测的，由数值来判断是阴性还是阳性的结果。特点：一、高效、灵敏、特异的抗体；二、稳定的重复性和可靠性；三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体；四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型；五、节省实验经费。以上内容参考：百度百科--elisa试剂盒

简介ELISA方法的主要原理、试验步骤、结果判定方法。

(1)基本原理：把抗原在不损坏其免疫活性的条件下预先结合到某种固相载体表面；测定时，将受检样品和酶标记物按一定程序反应形成复合物，并加入酶作用的底物;反应终止时，根据定性或定量分析有色产物的量来确定待检样品中的抗体的含量。(2)试验步骤：抗原包被→洗涤封闭→加待检血清（同时设立阴阳性对照）→反应一定时间→洗涤→加酶标二抗→反应一定时间→洗涤→加底物溶液→反应一定时间→终止反应→判定结果(3)结果判定：肉眼观察或仪器测定，可以阳性与阴性表示结果、以P/N比值表示结果、以终点滴度表示结果或以标准曲线进行定量测定。

何谓elisa?简述其原理及临床意义

酶联免疫吸附实验(ELISA) 即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。基本原理它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂） ②酶标记的抗原或抗体（标记物）③酶作用的底物（显色剂）测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物（标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应结合后，再加上酶的相应底物，即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。其所生成的颜色深浅与欲测的抗原（抗体）含量成正比。 这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察，也可以用分光光度计（酶标仪）加以测定。其方法简单，方便迅速，特异性强。elisa的临床意义，要根据具体的检测对象来看，主要是检测样本的含量以及定性，仅供参考